从动物组织内提取总RNA样品后,常用的检测方法有:
琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶电泳可以初步检测RNA样品的完整性和降解情况。正常的RNA在琼脂糖凝胶上会呈现两个明显的带状,即28S和18S rRNA,且28S rRNA的电泳迁移速度慢于18S rRNA,若检测结果表明28S rRNA条带较弱甚至消失,则说明RNA样品可能存在降解。
分光光度法:利用分光光度计可以测量RNA样品的浓度,并计算出样品的摩尔吸光系数。RNA的吸收峰位于260nm处,一般情况下,A260/A280值在1.8-2.0之间时,说明RNA样品的纯度较高。
比色法或荧光法:用比色法或荧光法检测RNA中是否含有污染物质(如蛋白质、盐等)。一些商用试剂盒也可以用于RNA的纯化和纯度检测。
这些检测方法的依据是,正常的RNA会呈现出清晰的28S和18S rRNA条带,而降解的RNA样品中28S rRNA的条带较弱或完全消失;RNA在260nm处有明显的吸收峰;RNA样品的A260/A280比值在1.8-2.0之间,表明纯度较高。同时,比色法或荧光法可以检测RNA中是否存在污染物质,从而保证RNA样品质量的准确性和可靠性。