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制作一个蛋白质体外结合的办法
发布于 2023-06-07 07:59:15
蛋白质体外结合是指在离开细胞质环境下，两个或多个蛋白质之间发生特异性的非共价相互作用，形成复合物。以下是一些常用的蛋白质体外结合方法：
- 亲和层析：利用亲和剂选择性地捕获目标蛋白质，再用洗脱剂将目标蛋白质释放出来。通常将亲和剂固定在某种特定的基质上，制备成柱子，称为亲和柱。此方法适用于鉴定蛋白质与配体之间的相互作用。
- 利用GST（谷胱甘肽-S-转移酶）标签：在目标蛋白质表达载体上加入GST标签，在大量表达后，利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱纯化目标蛋白质，并利用洗脱剂将目标蛋白释放出来。此方法能够在原位分离和纯化蛋白质与其配体或互作蛋白质。
- 双杂交法：双杂交法是通过将目标蛋白质与其基因座进行重组，形成了一个转录因子-诱饵融合体系和一个靶蛋白-猎物融合体系。在这两个体系中，只要有蛋白质存在就会触发荧光素酶反应，从而用于鉴定互作蛋白质。
- SPR（表面等离子共振）技术：使用此方法结合目标蛋白和其配体产生的生物分子间微弱交互作用来进行检测。此法不需要对分子进行标记，能够实时监测相互作用的动力学特性和亲和力常数。
这些是常见的一些蛋白质体外结合方法，可以根据具体的实验目的选择适合的方法。
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