【多选题】
A 引物长度 18～30bp，过短则降低特异性，过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增，同时也增加引物合成的成本。
B 避免引物内部或引物之间存在互补序列（3 个碱基），避免序列内有较长的回文结构，减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的形成。
C G/C 和 A/T 碱基均匀分布，G+C 含量在 40～60%之间，引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布，避免出现嘌呤或嘧啶连续排列。
D 引物 3’末端碱基应与模板 DNA 严格配对，5’末端碱基可不与模板 DNA 匹配 以及添加与模板无关的序列。
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