PCR引物设计原则有

发布于 2021-04-19 19:14:45
【多选题】
A 引物长度18~30bp,过短则降低特异性,过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增,同时也增加引物合成的成本。
B 避免引物内部或引物之间存在互补序列(3个碱基),避免序列内有较长的回文结构,减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的形成。
C G/C和A/T碱基均匀分布,G+C含量在40~60%之间,引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布,避免出现嘌呤或嘧啶连续排列。
D 引物3’末端碱基应与模板DNA严格配对,5’末端碱基可不与模板DNA匹配以及添加与模板无关的序列。

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